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    • PCR仪 核酸分子分选技术助力单病毒基因组学研究

      点击量:15   达普生物更新于2022-09-26

      向测序通过将资源集中在感兴趣的分子上,以实现高灵敏度及经济有效的目标区域深度平行测序。通常感兴趣的靶标或生物以百分之几的比例存在,处于治疗中的病毒DNA更是以人基因组的十亿分之几存在。为避免DNA测序的大量浪费,需要对靶标进行富集,然而现有的PCR或杂交捕获方法在靶向富集能力和目标捕获长度方面都很有限。据此,来自加州大学旧金山分校的科学家们开发了基于微流控单液滴分选技术对靶标核酸富集,实现了使用最小的先验目标信息,实现长度为>10kbp分子的百万倍富集。本研究通过对HIV感染者的HIV原病毒单个基因组的分离和测序证明这种方法的有效性。该方法适用于研究和临床应用中的罕见靶点测序,包括识别癌症相关突变或感染细胞的病毒测序,研究结果发表在《AnalyticalChemistry》杂志上。实验设计1、需要富集的DNA混合物、引物、探针及反应mix混合;2、用数字PCR液滴包裹仪将上述反应体系分割成单液滴;3、PCR扩增;4、微流控单液滴分选富集阳性液滴并回收DNA;5、DNA与引物、探针及反应mix混合并PCR扩增;6、二次液滴分选;7、回收DNA测序或qPCR检测。实验流程实验结果分析1、数字PCR扩增后进行单液滴阳性分选,成功从含107倍lambdaDNA背景中富集出了ΦX174病毒基因组,第一轮富集度为160倍,第二轮富集达16000倍,证实单液滴分选联与数字PCR用可实现对微量靶标基因组的高效富集。2、将感染HIV病毒的细胞与非HIV感染细胞gDNA混合以模拟潜伏感染HIV的浓度,之后通过数字PCR与单液滴分选联用富集回收含HIV的液滴,测序结果显示:●分离出了含完整病毒基因组的液滴,富集度高达600万倍;●不但实现了单个病毒的分离和测序,还获得整合的原病毒全长基因组;●确定HIV在宿主基因ARIH2中的整合位点;●有效的解决了抗逆转录病毒治疗期间低载量HIV的检测,为单病毒基因组学研究提供强大工具。总结数字PCR技术与单液滴分选技术联合用于富集微量核酸靶标测序:1、能以最小的已知序列富集长片段分子,如对≥100kb的分子进行百万倍富集,可用于宏基因组样本中人类基因突变或自然产物基因簇富集测序特征分析。2、该方法可检测到任何核酸,包括通过添加逆转录步骤的RNA,可以实现对融合基因或低丰度变异进行测序。3、能对如HIV等罕见单一病毒基因组高灵敏度回收和测序,为单个病毒基因组学的研究提供强大工具。解决方案达普生物秉承为广大科研及临床工作者和企业客户提供世界领先技术平台的理念,聚团队研发力量结晶开发了基于微流控技术的单液滴分选和数字PCR技术平台——Comet彗星单液滴分选仪+Nebula星云全自动数字PCR系统,全面解决超微量核酸靶标测序瓶颈,为单个病毒基因组学、靶序列富集相关的宏基因组测序,低丰度变异样本、融合基因等研究提供强大工具。参考文献:SequencingUltrarareTargetswithCompoundNucleicAcidCytometry,2021,Anal.Chem.

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    • 空气加温器 预防低体温的护理措施

      点击量:4   佰润更新于2022-11-01

      围术期人体温度受到麻醉剂的抑制,同时由于病人暴露于低温环境中,导致深部体温低于36℃,即低体温。低体温发生率为50%-70%,对人体的生理功能影响较大,严重者可危及生命。现将围术期影响病人体温变化的因素及护理介绍如下。1、围术期影响体温变化的因素病人在手术过程中,因药物、麻醉、环境等因素,不能给人体力过度消耗,特别是新生儿、婴幼儿、年迈病人及胸腹腔手术时间较长的病人可致体温下降,这对病人预后极为不利,心功能不全者更加文献。1.1麻醉对体温调节功能的影响A静脉麻醉药(如异丙酚)和阿片类药物(如芬太尼)均显著降低冷风影的温度阀值,吸入麻醉药(如地氟醚和异氟醚)也可显著降低冷反应的温度阀值。B神经阻滞麻醉,即干扰了温度感受,也抑制了正常的温度调节反应,如出汗、血管收缩和寒战。C局麻药可引起周围血管扩张,相对与较高的皮肤温度,可误导中枢温度调节系统,使病人耐受较高的热量散失仍不触发冷反应。1.2环境温度的影响目前,大部分手术室都配有空调设备或空气净化系统,并且主张手术室温度设定于24℃-25℃为宜,病人在室温中呼吸,吸入气体为室温,呼出气体为34℃-36℃,以通气量5L/min,吸入气体为20℃,呼出气体为36℃计算,呼吸时机体为加温气体而散失的热量约为100.36J/min,这部分热量通过气体对流丢失。因此,手术室温度应适宜,过低或过高都会影响麻醉及手术全过程。1.3各种护理操作的影响手术病人进入手术间后要进行各项操作,如静脉输液、输血、术前皮肤消毒及摆放合适的体位等。静脉输注的液体和皮肤消毒液与机体直接接触,这些液体极易挥发,带走体内的大部分热量。同时操作时身体暴露于空气中,体温与室温形成温差,加大热量散发。开放的创面、暴露的脏器也散失一部分热量,术中进行体腔冲洗等均为体温下降的原因。1.4其他因素小儿、年老、低体质病人易出现低体温。小儿、婴幼儿体温调节中枢发育尚不完全,极易受外界环境影响。年老体弱者基础代谢率降低,再加上创伤、体质瘦弱等因素均可影响体温变化。2、围术期低体温对病人的影响2.1增加伤口感染率围术期低体温可降低机体免疫力,使术后伤口感染等并发症的发生率增高,影响病人预后,使住院日延长20%。2.2增加心血管并发症国外一项研究发现,低温可抑制心肌收缩力、降低心输出量,导致心机缺血和心率失常的发生,与正常体温者相比,不稳定心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心率失常、心动过速、心搏骤停等心血管意外疾病的发生率明显增高。2.3影响凝血功能围术期低温可使红细胞变形,影响正常凝血功能,使血小板和各种凝血因子数量减少,功能减弱,降低凝血物质的活性,从而抑制凝血功能,出血时间可延长5倍-7倍。因此,低温可增加手术中和手术后渗血量及腹腔引流量。由于低体温而产生的凝血功能障碍、心功能异常、抵抗力降低等并发症在一定程度上影响了病人的康复过程。3、围术期低体温的护理术中体表加温-病员加温系统是专门为预防围术期低体温而设计,是现代首饰是必备的加温设备。产品采用专利技术制作的柔性碳纤维材料发热,具备更安全、发热更均匀等特性。目前国内以江苏佰润医疗科技有限公司生产的病员加温系统为代表,该产品由一台温度控制器(双路输出:首创)、一张加温垫、一张加温毯组成,适用于正常体位、结石位、侧卧位、俯卧位等手术体位,配置科学、灵活、合理。

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