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影响ELISA试剂盒实验的因素

2020-09-18  点击量:

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活,结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高,对杂质的反应灵敏度也高,实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高,也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正,酶免测定血清用血量很少,如手工加样器的性能不好,吸取样品不,会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前,应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用,试剂用完及时放回冰箱冷藏,以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部,以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分,会使结果假性增高,过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽,特别是冬季板从37℃水浴箱取出时,底部留有水汽,应将板底擦干后进行比色,水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡,依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落,温度低于4℃,影响反应速度。

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